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23966-2g的廠家2016年底已經停產,現在的規格是23966-1g
Polyscience,Inc,成立于1961年,起家于化學但超越化學領域的美國制造商,總部位于賓夕法尼亞州沃靈頓,公司業務主要涵蓋三大塊:1.實驗用產品:a)成千上萬種具品牌特色的化合物和試劑,應用于實驗室研究,組織學,電鏡和解剖病理學以及其他診斷和生命科學研究;b)種類極其寬廣的單體和聚合體,滿足各方研究領域;c)有機/無機化合物,生物可降解材料,磁珠,熒光素,染料和特定抗體,以及常規蛋白包被顆粒(直徑范圍40nm~10mm)的首要制造工廠;d)頂端多聚化合物的供貨中心,滿足各種高性能工業領域需求,包括替代能源,汽車電子,國防&航空電子,便攜式通信和計算機,醫療器械組裝。2. 定制合成;3.cGMP生產服務。
PEI轉染手冊
轉染操作流程:
1、細胞傳代:
轉染前24h內分離293T細胞至含10%胎牛血清的DMEM培養基 中進行傳代培養,接種密度如下:
6孔板:0.5x106細胞
10cm培養皿:4.0x106細胞
15cm培養皿:9.0x106細胞
2、轉染
轉染前將所有試劑置于室溫。
2.1質粒DNA的稀釋
在無菌試管中,用無血清的DMEM W / O酚紅培養基(濃度為10%)稀釋質粒DNA(ug)。病毒包裝體(psPAX2):病毒包膜(pMD2G)和重組質粒DNA的稀釋比例分別為4:2:1。
6孔板:200ul+3ug的DNA
10cm培養皿:1ml+7-8ug的DNA
15cm培養皿:2ml+11-12ug的DNA
2.2 轉染復合體形成
將PEI(1ug/uL)加入已稀釋的總DNA中,PEI與DNA(ug)的混合比率為3:1。加入后立即渦旋混合。
6孔板:9ul PEI復合體(1ug/ul)=9ug
10cm培養皿:21ul PEI復合體(1ug/ul)=21ug
15cm培養皿:33ul PEI復合體(1ug/ul)=33ug
將添加到細胞的DNA/ PEI的混合物在室溫下孵育15分鐘。
4、收獲轉染細胞
轉染后48小時內收獲轉染細胞/或病毒上清。
試劑的配制:
PEI(1ug/ul) Polysciences(CAT#23966-2配制成儲液:)
1、將無內毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI,冷卻到室溫。
2、調整pH值至7.0,用0.22um的濾器過濾消毒,分裝后儲存在-20℃。工作液可保持在4℃
Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 23966-2為Polysciences公司生產的化合物產品,每批產品出廠前都經過嚴格的檢測,保證每批產品都*、穩定且高品質,但由于作為轉染試劑使用過程中有很多實驗室因素(PH,水純度,稱量的準度,dna純度…)造成溶解出現問題或者轉染效率出現差異,所以廠家只受理該產品純度,分子量及重量缺失破損等相關投訴